- TOYOBO原裝PCR用cDNA合成試劑盒FSQ-101
- 型號：FSQ-101
- 報價：
- 地區(qū)：上海市
- FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒,上海復(fù)申生物江浙滬授權(quán)代理商，常年現(xiàn)貨TOYOBO原裝PCR用cDNA合成試劑盒FSQ-101更多現(xiàn)貨產(chǎn)品訂購！
- 021-34600120
FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒
產(chǎn)品介紹：
適用于合成Realtime PCR用cDNA的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒。
本試劑盒是適用于Realtime PCR用cDNA制作的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)試劑盒。由于采用了本公司
高性能逆轉(zhuǎn)錄酶『ReverTra Ace』，反應(yīng)效率非常出色。另外，通過改良，使得帶入到
Realtime PCR反應(yīng)體系中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液的影響降到小，即使在PCR反應(yīng)體系中添加
了多至20％體積的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，也能表現(xiàn)出良好的反應(yīng)曲線，因此，適合用于表達(dá)量
較少的mRNA的高靈敏度測試。由于精簡了試劑盒的構(gòu)成，可非常簡便地進(jìn)行操作，僅需
約15分鐘的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，即可得到充分的cDNA。
特征1. 超群的cDNA合成效率
由于使用了恰當(dāng)比例的mix primer（oligo dT和Random primer）、以及經(jīng)改良的反應(yīng)緩沖液，可實(shí)現(xiàn)高效率的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
特征2. 反應(yīng)時間僅需15分鐘
逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)僅需15分鐘即可完成。此外，即便是要除去對Realtime PCR反應(yīng)有阻礙的殘留的模板RNA，也無須追加RNase H處理。
特征3. 提高了和Realtime PCR試劑的適應(yīng)性
通過改良，使帶入到Realtime PCR反應(yīng)體系的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液的影響降到小。即使在PCR反應(yīng)體系中添加了多至20% (V/V)的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，也能表現(xiàn)出良好的反應(yīng)曲線。因此，適合用于表達(dá)量較少的mRNA的高靈敏度檢測。
FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒
規(guī)格參數(shù)Specifications
實(shí)驗(yàn)例1 與用其他公司產(chǎn)品cDNA合成量的比較
以來源于HeLa細(xì)胞的total RNA 100ng為模板，根據(jù)各公司試劑盒推薦的條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。然后，在Realtime PCR反應(yīng)液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分別添加上述的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液各1% (V/V)，用Realtime PCR對β-Actin和Polymerase ε的cDNA量進(jìn)行定量。結(jié)果可見，在使用本試劑盒的情況下，兩個目的片段都有high的收量。
實(shí)驗(yàn)例2 RNase H處理與否對檢測靈敏度影響的比較
以來源于HeLa細(xì)胞的total RNA 100ng為模板，使用ReverTra Ace qPCR RT Kit（藍(lán)線）及另外添附RNase H的B公司cDNA合成試劑盒，按各自推薦的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(B公司試劑盒分別按RNase H處理（紅線）/未處理（橙線）兩種方法進(jìn)行)。然后，按和實(shí)驗(yàn)例1同樣的方法檢測β-Actin的擴(kuò)增效果。結(jié)果顯示，用B公司的試劑盒RNase H未處理（橙線）的情況下，檢測效果大幅下降。而用ReverTra Ace qPCR RT Kit（藍(lán)線）進(jìn)行反應(yīng)，即便不追加RNase H處理也能顯示出很高的擴(kuò)增效率。已經(jīng)過實(shí)驗(yàn)證明，用本試劑盒的情況下，RNase H處理與否靈敏度相等。
※本試劑盒不包含RNase H處理步驟。
實(shí)驗(yàn)例3 模板RNA量的添加量對合成效率影響的探討
在ReverTra Ace qPCR RT Kit的反應(yīng)體系(10μl)中，分別添加HeLa細(xì)胞由來的total RNA 0.5μg - 0.5pg，分別進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。然后，采用和實(shí)驗(yàn)例2同樣的方法擴(kuò)增β-Actin基因。結(jié)果可見，在探討的范圍內(nèi)，模板RNA的量和cDNA的收量密切相關(guān)，但無論模板RNA量的多寡，仍可維持很高的cDNA合成效率。由此可見，在目的片段濃度有差異的樣品之間，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)效率的變化并不大，因此可將定量結(jié)果的誤差控制在小范圍內(nèi)。
簡要備注
Q1. 雖然反應(yīng)時間僅需15分鐘，但如果延長反應(yīng)時間，是否可提高cDNA的合成量？
A1. 要對tRNA等高表達(dá)量的RNA進(jìn)行*逆轉(zhuǎn)錄時，延長反應(yīng)時間可提高合成量，但一般情況下按照標(biāo)準(zhǔn)的推薦條件37℃15分鐘即可。
Q2. 可使用哪些模板RNA?
A2. Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各種RNA都可以使用。
Q.3 需要進(jìn)行RNase H處理嗎?
A3. 由于殘留的模板RNA會阻礙PCR反應(yīng)，所以一般情況下逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)結(jié)束后都要通過RNase H分解模板RNA。但本試劑盒運(yùn)用本公司開發(fā)的新系統(tǒng)，在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后可用非酶性方法除去模板RNA。因此，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后無需RNase H處理。
參考文獻(xiàn)
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6）S.Lee et al.,Gene,245:253−266（2000）
價格表
品名及內(nèi)容 | 包裝 | 保存溫度 | Code No. | 價格 |
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ReverTra Ace qPCR RT Kit | 40次份* | -20℃ | FSQ-101S | RMB 300 | |
200次份*×1 | -20℃ | FSQ-101 | RMB 1,500 |
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200次份*×2 | -20℃ | FSQ-101B | RMB 2,760 |
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200次份*×4 | -20℃ | FSQ-101C | RMB 5,000 |
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*反應(yīng)體系為10μl時的反應(yīng)次數(shù)。
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